【摘要】
按照體內體外不同研究途徑，對近年來中醫藥治療呼吸道合胞病毒（RSV）感染的實驗研究進展進行綜述，爲以後相關研究進行展望。認爲應該加強抗病毒作用環節和免疫學相關機制研究，以求開發針對RSV感染的抗病毒、提高機體抗病能力的新藥，進而產生新的中醫藥理論來指導RSV的臨牀治療。
【關鍵詞】
呼吸道合胞病毒；實驗研究；文獻綜述
呼吸道合胞病毒( Respiratory syncytial virus,RSV)是導致嬰幼兒下呼吸道感染最重要的病原,能引起支氣管炎、毛細支氣管炎、呼吸道合胞病毒肺炎等疾病，尚可誘發過敏症和哮喘[1-2]，某些體弱患兒可發生心力衰竭等危重情況，甚至可導致患兒死亡，嚴重危害嬰幼兒健康,西醫尚無安全有效的疫苗和藥物控制[3]。中醫藥在抗RSV感染方面有獨特的優勢，多項臨牀研究證實其療效顯著，進一步闡釋相關機理並開發安全有效的抗RSV感染藥物有重大意義。本文僅就近年來中醫藥治療RSV感染的實驗研究進展綜述如下。
1 體外實驗研究
1.1單味藥物研究
1.1.1藥物有效成分實驗研究
樑榮感等[4]觀察大黃蒽醌類化合物對RSV引起的細胞病變(CPE)的抑制作用,結果證實其對RSV抑制作用存在明顯的量效反應關係，證實RAA在人喉癌細胞（Hep|2）中對RSV有抑制作用。張鳳梅等[5]透過細胞培養法觀察敗醬草抗病毒多糖AP4對RSV感染人宮頸癌細胞（Hela）的治療作用，發現AP4抑制RSV的半數有效濃度(EC50)爲0.097 mg/mL,治療指數(TI)爲114,證實敗醬草抗病毒有效部位AP4在Hela細胞中對呼吸道合胞病毒有明顯的抑制作用。王意忠等[6]採用細胞培養技術，利用CPE法觀察梔子提取物ZG對RSV等6種呼吸道病毒致細胞病變的影響。實驗結果顯示,體外抗病毒試驗中, 梔子提取物ZG 對RSV、甲型流感病毒等所致細胞病變有明顯抑制作用。王秀琴等[7]採用煎煮法、二氯甲烷萃取法和柱層析法提取分離得到甘草抗病毒有效部位(GD4)，觀察GD4在Hela細胞中對RSV的抑制作用。結果發現GD4對RSV的抑制作用存在量效關係；在感染後至少12 h以內給藥, GD4能夠有效抑制RSV的複製。認爲GD4在Hela細胞中對RSV有明顯的抑制作用。
1.1.2含藥血清實驗研究
楊潔等[8]採用水提醇沉法提取中藥黃芩有效成分，採用觀察細胞病變和MTT法,觀察清熱抗感沖劑及其含藥血清在Hep|2細胞中抑制RSV的作用,結果發現黃芩提取物及其含藥血清具有不同程度抑制RSV病毒複製的作用。趙宇紅等[9]採用MTT比色法檢測魚腥草對Hep|2單層細胞的毒性作用,透過空斑試驗和試管觀察細胞病變法確定魚腥草對RSV的抑制作用。結果顯示魚腥草(1∶10)可以完全抑制稀釋度爲10-5(100 CID50)的RSV、半數抑制10-4(1 000 TCID50)的RSV,可使空斑明顯變小，認爲魚腥草注射液對RSV有體外抑制作用。
1.2 中藥複方機理實驗研究
1.2.1藥物有效成分實驗研究
楊道鋒等[10]觀察複方抗病毒製劑作用後的病毒對細胞的攻擊作用，結果顯示覆方抗病毒製劑能抑制流感病毒的血凝活性和RSV對靶細胞的攻擊作用，認爲複方抗病毒製劑體外對流感病毒和RSV具有較強的抑制作用。王孟清等[11]將RSV接種於Hela細胞單層增殖，取不同濃度的截哮口服液藥液加入病毒,觀察在細胞單層上的空斑形成以判定病毒產量。結果截哮口服液使RSV產量減少,藥物濃度的高低與病毒產量的高低呈明顯的負相關；其對RSV有直接滅活作用，且能影響病毒的吸附與吸附後的複製過程。王桂亭等[12]透過銀黃直接抗病毒、病毒感染細胞同時使用銀黃、先使用銀黃再感染病毒3種給藥方法,觀察Hep|2和Hela細胞病變效應。結果發現注射用銀黃在Hep|2和Hela細胞上對RSV均有明顯的抗病毒作用。認爲注射用銀黃對RSV具有抑制和直接殺滅的特異性。
馮旰珠等[13]以CPE法及四氮唑鹽還原法(MTT法)比較不同藥物濃度及不同給藥方式下熱毒寧對RSV的抑制作用效果，發現熱毒寧注射液預防給藥方式、細胞外直接滅活及治療給藥方式均有抗RSV作用,該抑制作用存在着明顯的量效反應關係。認爲熱毒寧對RSV有直接滅活作用,對RSV侵入Hep|2細胞有阻斷作用,對RSV在Hep|2細胞內增殖有抑制作用,相同濃度下,預防作用更顯著。葉卉初等[14]將Hep|2細胞分成病毒唑、咳喘平、病毒唑+咳喘平3組,運用細胞培養技術，各細胞組加入RSVLong株病毒並分別加入上述3種藥物的稀釋液，透過觀察CPE來觀察RSV的抑制作用。試驗表明,在用藥量降至1/4時,在Hep|2細胞上連續觀察5 d,仍不產生細胞病理變化,對RSV有完全抑制作用。說明兩藥聯合應用時產生了很強的協同作用。
1.2.2含藥血清實驗研究
汪受傳等[15]用不同劑量的清肺口服液製成含藥血清處理RSV感染後的Hep|2細胞,用組織細胞培養法,採用CPE觀察和MTT法檢測清肺口服液含藥血清對RSV感染細胞的增殖抑制作用。結果發現在Hep|2細胞上,清肺口服液的最大無毒濃度爲1∶9。100 TCID50 RSV攻擊後Hep|2細胞的OD值明顯降低,加入中、高劑量含藥血清後OD值升高。證實清肺口服液含藥血清對RSV有抑制作用。廖輝等[16]在組織培養半數感染量以及含藥血清對細胞最大無毒濃度測定基礎上，行溫度轉換試驗。結果顯示：溫度轉換前（黏附階段）加入金欣口服液含藥血清，實驗組和對照組OD值差異無統計意義；溫度轉換後（侵入階段）加入金欣口服液,含藥血清組OD值明顯升高，與對照組比較差異有高度統計意義（P<0.01）。認爲金欣口服液含藥血清的抗病毒作用在RSV黏附後的膜融合及侵入階段。廖輝等[17]將人胚肺成纖維細胞分組,RSV病毒攻擊後,利用電鏡觀察各組人胚肺成纖維細胞超微結構的變化。結果表明:病毒感染組細胞核增大,核質比增加,核仁凝聚,核膜凹陷成夾層,包涵體形成,線粒體凝聚,粗麪內質網擴張,溶酶體增多,核染色質濃縮,細胞外可見病毒顆粒。含藥血清感染後給藥組,細胞核增大,核仁凝聚,粗麪內質網擴張,線粒體凝聚,但程度較輕。證實RSV感染人胚肺成纖維細胞後,細胞可出現超微結構的改變,清肺口服液含藥血清可以減輕這種改變,感染時給藥比感染後給藥作用更明顯。莫紅纓等[18]以ELISA法測定炎症介質的含量,觀察複方雙黃連及其含藥血清以不同的給藥方式對RSV刺激A549細胞引發的炎症介質IL|8、IL|6、TNF|α釋放的作用。研究發現雙黃連複方及其含藥血清均能顯著降低RSV誘導A549釋放的IL|8水平,並以感染前給藥的途徑下調IL|8的作用最爲明顯，在病毒感染的氣道炎症控制中起着一定的作用。
2 體內實驗研究
2.1 病毒抑制作用研究
徐霞等[19]用金貝清肺顆粒不同劑量給雄性BALB/C小鼠灌胃，3 d後鼻腔接種RSV，繼續給藥7 d，動物眼靜脈叢取血,牽頸臼處死,無菌取肺組織,做肺組織病毒含量檢測。結果顯示，金貝清肺顆粒4個劑量組動物的肺組織病毒含量與模型對照組比較下降均超過一個指數。表明金貝清肺顆粒對小鼠體內RSV具有明顯的抑制作用。吳成林等[20]在小鼠體內觀察雙黃連口服液對RSV染毒小鼠的死亡保護作用以及對小鼠心、腦、肺內病毒增殖的影響,發現雙黃連口服液能抑制RSV的增殖,並見病毒的感染性滴度隨藥物濃度的增加而下降；治療RSV感染鼠結果發現,雙黃連口服液對RSV感染鼠有保護作用,隨着藥物劑量增加,療效增強；該口服液還能降低組織內病毒滴度,阻止體內病毒複製,抗RSV作用類似於同劑量的病毒唑。
2.2 免疫功能調節作用機制研究
夏泉等[21]在小鼠感染RSV的同時,各給藥組分別灌胃利巴韋林和莪術油油溶液,腹腔注射莪術油葡萄糖注射液。按肺質量除以體質量逐個計算肺指數（LI）和各組肺指數抑制率。結果表明，病毒對照組小鼠的LI明顯增加，應用莪術油油溶液後,動物LI明顯減低,治療效果呈現較顯著的劑量相關性。且高劑量莪術油油溶液治療效果優於利巴韋林。此外，莪術油葡萄糖注射液和利巴韋林對RSV 感染小鼠的LI也具有明顯的降低作用。鄭淑梅等[22]對60例RSV肺炎患兒外周血T細胞亞羣及血清白細胞介素-2水平進行測定，應用雙黃連粉劑靜滴治療7 d，療程結束後複查發現患兒CD+4、CD+4/CD+8及血清IL|2水平升高，CD+8降低，認爲雙黃連可調節T細胞亞羣平衡、增強細胞免疫功能，對疾病康復有促進作用。
3結語
RSV感染對小兒和部分免疫功能低下的成年人健康構成較大威脅，日益爲人們重視。中醫藥在抗RSV感染中展示了自身獨有的優勢，對其作用機制也進行了積極的`探索。隨着研究的不斷深入，細胞培養、MTT、血清藥理學方法等研究手段逐漸爲人們所熟知，細胞因子對炎症部位細胞凋亡機制的影響等分子生物學方面的研究也正爲更多的研究人員所接受，但仍存在着研究方法單一、研究指標落後、研究思路和方法缺乏創新性等諸多問題。在抑制病毒的作用研究中，多是透過檢測細胞病變改善的程度來描述藥物的抗病毒作用，對於其具體作用環節尚缺乏詳盡的研究，值得我們進一步深入探討。可喜的是一些生物化學、免疫學等相關專業科研人員從研製新的有效單體等角度進行探索，爲進一步揭示藥物抗病毒規律及免疫學相關機制提供了新的方法，爲中醫藥學的整體發展注入了新的力量，提供了新的思路。當前研製開發安全可靠的防治RSV感染的新藥,仍是國際醫學界有待解決的重要課題之一。
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