【摘要】 目的 考察硫酸長春新鹼脂質體的體外釋放度及其藥效。方法 採用pH梯度法制備硫酸長春新鹼脂質體，用透析法測定其體外釋放度和血漿釋放度，透過抗小鼠S180腫瘤的抑瘤率評價藥效。結果 硫酸長春新鹼脂質體體外釋放度符合零級動力學模型;聚乙二醇單甲醚2000膽固醇琥珀酸酯修飾的硫酸長春新鹼脂質體釋放度降低，抑瘤率顯着提高。結論 長循環硫酸長春新鹼脂質體降低藥物釋放度，提高藥效。
【關鍵詞】 硫酸長春新鹼 脂質體 長循環脂質體 釋放度 藥效學
Abstract:Objective To investigate the release rate and pharmacodynamics in vitro of of vincristine sulfate liposomes. Methods Vincristine sulfate liposomes was prepared by pH gradient method. The release rate was measured by dialysis method. Pharmacodynamics of vincristine sulfate liposomes was evaluated by its antitumor efficacy. Results The release rate of vincristine sulfate liposomes in vitro was fitted to zero?order model. After modification with long?circulating adjuvant, the release rate of vincristine sulfate liposomes decreased and antitumor efficacy increased obviously. Conclusion Long?circulating vincristine sulfate liposomes decrease release rate and increase curative effect.
Key words:vincristine sulfate; liposome; long?circulating liposome; release rate; pharmacodynamics
硫酸長春新鹼(vincristine, VCR)爲長春花生物鹼類抗腫瘤藥物，對白血?⒘馨土鼉哂邢災?鈈浴A俅燦τ玫牧蛩岢ご盒錄釵?⑸浼粒?嬖謐乓┪鋨腖テ詼獺⒋?豢臁⑸窬?低澈臀賦Φ藍拘鄖康熱鋇恪S醒芯勘礱鰨??侍遄魑?怪琢鮃┪鐫靨蹇梢願納埔┪錮砘?災省⑻岣吡菩А⒔檔拖低澈吞囟ú課唬ㄈ縲腦唷⑸觶┑畝靖弊饔茫?]。Peter MK等人的研究也表明，硫酸長春新鹼製成脂質體能改善藥物體內行爲、提高療效、降低毒副作用[2]。因此，抗腫瘤藥物與脂質體結合的處方設計越來越受到關注。
本文采用主動載藥法中的pH梯度法，以氫化大豆卵磷脂/膽固醇(HSPC/Chol)爲脂質體膜製備硫酸長春新鹼脂質體。考察硫酸長春新鹼脂質體的釋放度和抗小鼠S180腫瘤抑瘤率，同時考察長循環輔料聚乙二醇單甲醚2000膽固醇琥珀酸酯(CHSPEG2000)對釋放度和抑瘤率的影響，以期爲該藥臨牀應用提供更好的給藥劑型。
1 實驗材料
1.1 試藥
硫酸長春新鹼(廣州環葉製藥有限公司)，硫酸長春新鹼對照品(中國藥品生物製品鑑定所)，氫化大豆卵磷脂(HSPC，德國)，膽固醇(Chol，藥用，溫州市甌海食品生化廠)，CHSPEG2000 (聚乙二醇單甲醚2000膽固醇琥珀酸酯，自制)，陽離子樹脂(上海樹脂廠)，其他試劑均爲分析純。
1.2 儀器
P230高效液相色譜儀(大連依利特)，FC204分析天平(上海精科儀器廠)，電熱恆溫水浴鍋(大連醫療器械廠)，PHS?25型pH計(上海精科雷磁)，DF?101磁力攪拌器(鞏義市英峪予華儀器廠)，透析袋(美國VIKASE公司)，M?110L型微射流儀(美國microfluids公司)。
1.3 動物
小白鼠(18～22 g，瀋陽藥科大學實驗動物中心，SCXK 遼2005-008);家兔(2～3 kg，瀋陽藥科大學實驗動物中心，SCXK 遼2005—008);S180腫瘤(遼寧省腫瘤研究所)。
2 方法與結果
2.1 pH梯度法制備硫酸長春新鹼脂質體及包封率測定[3]
2.1.1 HPLC條件
色譜柱：Kromasil C18(200 mm×4.6 mm,5 μm);流動相：甲醇?水?二乙胺(體積比70∶30∶0.5)(磷酸調pH7.0);柱溫：35 ℃;流速：1.2 mL/min;紫外檢測波長：298 nm。
2.1.2 空白脂質體的製備
將HSPC、Chol按2∶1(質量比)混合，加適量無水乙醇，65 ℃水浴中加熱溶解，揮除乙醇，加枸櫞酸緩衝液(0.3 mol/L，pH 4.30)，65 ℃水化30 min，用微射流儀循環數次，依次透過0.8和0.45 μm的微孔濾膜整粒，得空白脂質體。將HSPC、Chol、CHSPEG2000按2∶1∶0.2(質量比)混合，其他操作同上，得長循環空白脂質體。
2.1.3 硫酸長春新鹼脂質體的製備
取空白脂質體0.2 mL、硫酸長春新鹼溶液(1.0 g/L)1.0 mL和Na2HPO4溶液(0.375 mol/L;pH 9.0)0.8 mL混勻(pH 7.3)，於60 ℃孵化10 min，得硫酸長春新鹼脂質體。取長循環空白脂質體同法操作，得長循環硫酸長春新鹼脂質體。
1.4 硫酸長春新鹼標準曲線製備
取硫酸長春新鹼對照品儲備液(0.1 g/L)，用70%(體積分數)甲醇配製成1.0，2.5，5.0，7.5，10.0，12.5 mg/L的系列溶液，濾過，HPLC測定;以峯面積(A)對質量濃度(ρ)線性迴歸，得迴歸方程A=14.5ρ+3.1(r=0.999 9)，線性範圍1.0～12.5 mg/L。
2.1.5 硫酸長春新鹼脂質體藥物回收率測定
取0.8，1.0，1.2 g/L的硫酸長春新鹼溶液各1 mL，分別加入空白脂質體0.2 mL和Na2HPO4溶液0.8 mL，製備不同濃度硫酸長春新鹼脂質體。取各濃度脂質體各0.3 mL分別置於5 mL量瓶中，以去離子水定容，搖勻，再取1.5 mL於5 mL量瓶中，以甲醇定容，搖勻，濾過，HPLC法測定。代入標準曲線計算藥物含量，進而計算回收率。結果表明，硫酸長春新鹼脂質體中藥物回收率爲 98.1%～101.8%。
2.1.6 硫酸長春新鹼脂質體包封率的測定
1.2”中硫酸長春新鹼脂質體0.3 mL兩份，一份置5 mL量瓶中，以去離子水定容，再取1.5 mL於5 mL量瓶中，以甲醇定容，混勻，濾過;另一份上陽離子樹脂柱，以去離子水洗脫，收集5 mL洗脫液，再取1.5 mL於5 mL量瓶中，以甲醇定容，混勻，濾過。HPLC測定，計算包封率：包封率=A過柱/A未過柱，其中A過柱表示脂質體包封的硫酸長春新鹼的色譜峯面積;A未過柱表示總的硫酸長春新鹼的色譜峯面積。
結果表明，硫酸長春新鹼脂質體的包封率爲86.9%，長循環硫酸長春新鹼脂質體包封率提高到92.8%。
2.2 硫酸長春新鹼脂質體體外釋放度的考察
2.2.1 分析方法建立
將4 mL空白脂質體裝入預處理好的透析袋中，於37 ℃生理鹽水(100 mL)中透析10 h，取外層透析液用紫外分光光度計於298 nm測定吸光度(λVCR 297.8 nm)，吸收值爲零。說明空白脂質體在10 h內未透過透析袋，可採用透析法測定硫酸長春新鹼脂質體的體外釋放度。