【摘要】目的探討仙人掌多糖(OPS)對高脂血症大鼠體內抗氧化、清除體內自由基的生物效應。方法 將8～10周齡高脂血症大鼠隨機分爲6組，每組10只，建立高脂血症大鼠模型，取肝臟勻漿測定天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)活性,並測定心臟組織SOD活性、MDA含量和抗超氧陰離子自由基活性。結果給藥10d後，OPS中、高劑量組與模型組比較，肝臟ALT活性、AST活性、心臟MDA含量顯著降低;心臟抗O-2·活性、SOD活性顯著增強。結論仙人掌多糖可能透過有效清除體內的氧自由基及抗脂質過氧化，實現其體內抗氧化的作用。
【關鍵詞】仙人掌多糖 高脂血症 氧化
Abstract：ObjectiveTo investigate the antioxidative effects of Opuntia dillenii saccharides(OPS) on hyperlipidemia rats in vivo. MethodsSixty rats were randomly divided into six was given to hyperlipidemia rats through gavage for 10 days. Then the activities of ALT and AST in rat liver were determined, meanwhile heart was sampled for measurement of MDA content, activity of SOD and the anti-superoxide anion free radical (O-2· ) respectively. ResultsCompared with control group, OPS could increase SOD activity , decrease the activities of ALT and AST, and reduce the content of MDA and O-2·lusion OPS has significant antioxidative activity and the mechanism may be related with oxygen free radical elimination and anti-lipid peroxidation.
Key words：Opuntia dillenii Haw. polysaccharides(OPS); Hyperlipidemia; Anti-oxidation
多糖是一類具有生物活性的生命大分子物質,它在抗腫瘤、抗氧化、抗炎症、刺激免疫以及降血糖方面都有一定的作用[1]。仙人掌多糖(OPS)是從仙人掌科植物仙人掌Opuntia dillenii. Haw的新鮮莖中提取的多糖。本研究試圖透過測定高脂血症大鼠肝臟天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)活性,心臟丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性，並檢測抗超氧陰離子自由基 (O-2·)活性的變化，探討OPS在體內抗氧化的情況，以期爲OPS的開發利用提供依據。
1、材料與儀器
1.1 動物SD大鼠(SPF級，動物合格證號：粵檢證字2004A027)，雄性，8～10周齡，體質量180～200 g，購於廣東醫學院動物實驗中心。
1.2 藥品及試劑 仙人掌Opuntia dillenii. Haw於2007-10採自湛江東海島附近，仙人掌多糖(Opuntia dillenii saccharides，OPS)提取參照蘭琦傑[2，3]等人的方法進行。
膽固醇(國藥集團化學試劑有限公司，批號F20070216);丙基硫氧嘧啶片(南通精華製藥有限公司，批號：061001);脫氧膽酸鈉(國藥集團化學試劑有限公司，批號：F20070521);脂必妥片(成都地奧九泓製藥廠，批號：0612069)。血清測定TC、TG試劑盒(南京建成生物工程研究所出品，批號：20070512) ;肝臟測定ALT、AST試劑盒(南京建成生物工程研究所出品，批號：20070312、20070402) ;心臟測定SOD、MDA和O-2·試劑盒(南京建成生物工程研究所出品，批號： 20071010、20071029、20071102)。其他試劑均爲國產分析純。
高脂乳劑的配製[4～6]：取豬油25 g放在200 ml的`燒杯裏，放在磁力攪拌器上加熱，待溫度升到100℃時，加入10 g 膽固醇，溶化，再加入1g丙基硫氧嘧啶片，充分攪勻，然後加25 ml 吐溫-80 ,製成油相。同時在另一燒杯中加30 ml蒸餾水和1,2丙二醇20 ml，放在電爐上加熱至60℃，然後加入2 g脫氧膽酸鈉,充分攪拌直到完全溶解，製成水相。然後將水相加入油相,充分混勻,即製成脂肪乳劑。
1.3 儀器 Olympus CKX41倒置顯微鏡， LEICA Rm2245電動進樣切片機。
2、方法
2.1 高脂血症動物模型的建立及分組[7，8]60只SD大鼠隨機分爲正常組(10只)和造模組(50只)。造模組喂飼高脂乳劑10 d後測定空腹血清TC、TG含量，將TC>6 mmol·L-1及TG>3 mmol·L-1的實驗大鼠確定爲高脂血症動物模型，50只大鼠隨機分爲低、中、高仙人掌多糖組(OPS治療組，劑量分別爲100，200，400 mg·kg-1·d-1)、模型組和藥物對照組(脂必妥藥物組)，每組10只。OPS組和脂必妥藥物組分別每天上午按劑量灌胃OPS或脂必妥片，各組動物下午灌胃生理鹽水或高脂乳劑。
2.2 實驗處理 在實驗的第4週末，所有動物禁食8 h，不禁水，此後腹腔注射1%戊巴比妥鈉麻醉，固定於鼠板上，開胸剝離出肝臟及心臟，去除油脂，取心尖部分置於福美琳溶液中固定，逐級酒精脫水，二甲苯透明，浸蠟，石蠟包埋，常規切片厚4 μm，HE染色，倒置顯微鏡下觀察。其餘部分用於各指標的測定。
2.3 統計學分析測定結果以±s表示，多組間均數比較採用Duncan多重檢驗，所有數據統計處理均採用SAS system 8.2 統計軟件進行。
3、結果
3.1 仙人掌多糖對高脂血症大鼠肝臟ALT、AST活性的影響分別採用2,4-二硝基苯肼法測定肝臟勻漿ALT活性，IFCC法測定肝臟勻漿AST活性。高脂血症大鼠ALT活性、AST活性與正常組比較分別升高了133.3%，76.6%,達到極顯著水平(P<0.01)。藥物對照組，OPS中、高劑量組ALT活性比模型組分別降低了69.17%、65.08%、74.33%，差異極顯著 (P<0.01)，高劑量組效果優於藥物對照組。低劑量組與模型組相比alt活性降低22.48%，無顯著差異(p>0.05);藥物對照組，OPS治療組均不同程度的抑制AST活性的升高，其中OPS低劑量組與模型組比較，AST活性降低21.36%存在較顯著差異(P<0.05)，OPS中、高劑量組、藥物對照組與模型組比較各降低了50.55%，49.31%，57.25%，接近正常水平，達到極顯著差異 (P<0.01)。結果見表1。表1 仙人掌多糖對高脂血症大鼠肝臟ALT、AST活性的影響(略)
3.2 仙人掌多糖對高脂血症大鼠心臟SOD活性、MDA含量、抗(O-2·)活性的影響心臟勻漿後按照黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性，改良硫代巴比妥酸法測定MDA含量和黃嘌呤氧化酶法測定抗O-2·活性。表2 仙人掌多糖對不同組別大鼠心臟中SOD活性及MDA含量，表3 仙人掌多糖對不同組別大鼠心臟中抗 O-2·活性的影響(略)。
從表2可見，與正常組比較，模型組大鼠心臟組織SOD活性略升16.58%，可能是體內的應激性反應造成SOD活性暫時增加;模型組大鼠心臟組織MDA含量則顯著增加了184.88%(P<0.01)。而OPS治療組與模型組比較，治療後高劑量組SOD活性較明顯升高了8.60%(P<0.05);OPS治療組均能顯著降低MDA含量(P<0.01)，降低率爲24.91%，29.75%，27.53%,與陽性組無顯著性差異。
從表3可見，與正常組比較，模型組大鼠心臟組織抗超氧陰離子自由基(O-2·)活性升高72.96%(P<0.01);而與模型組比較，治療後高劑量組抗O-2·活性進一步增加了34.89%，達到極顯著水平(P<0.01)且效果優於藥物對照組。
3.3 心臟病理學觀察見圖1。
3.3.1 正常組心肌纖維肥大不多見，結構正常，心肌細胞邊界清楚，心肌間質結構正常。心肌纖維分佈均勻，結構基本完整;心肌細胞顏色鮮豔。
3.3.2 高脂模型組心肌細胞壞死,心肌細胞邊界模糊，心肌纖維排列紊亂,心肌纖維肥大，脂質斑塊不規則,突出於管腔內;心肌細胞顏色比較暗淡。
3.3.3 OPS中劑量治療組心肌纖維分佈較均勻，仍有較多的脂質沉積，病變略微好於模型組;心肌細胞顏色略鮮豔於模型組。
3.3.4 OPS高劑量治療組心肌纖維分佈均勻，無明顯脂質沉積，病變明顯好於模型組;心肌細胞顏色接近於正常組。
4、討論