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樹突狀細胞免疫學論文

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當代,論文常用來指進行各個學術領域的研究和描述學術研究成果的文章,簡稱之爲論文。它既是探討問題進行學術研究的一種手段,又是描述學術研究成果進行學術交流的一種工具。下面就是小編整理的樹突狀細胞免疫學論文,一起來看一下吧。

樹突狀細胞免疫學論文

樹突狀細胞(DC)具有超強的抗原提呈能力,且能夠誘導初始 T 細胞活化,在免疫應答的誘導中具有重要作用[1].近年來,DC 疫苗在實驗室中廣泛應用於治療腫瘤的研究[2-3].探討 DC 2.4細胞疫苗在 MB 49 小鼠膀胱癌皮下移植瘤模型中的免疫學效應。

1 材料

(1)DC 2.4、MB 49 細胞,受贈於遼寧醫學院張佩教授。(2)C 57 BL/6 近交系雌性小鼠 36 只,8 ~ 12 周齡,體重 18 ~ 20 g,雌性,由上海斯萊克實驗動物有限公司提供,許可證編號:SCXK(滬)2012-0005.(3)FITC anti-Mouse CD 4、PE anti-Mouse CD69 購自美國 BD 公司。Anti-CD 4、Anti-CD 8、Goat Anti-RabbitIgG/HRP 購自北京博奧森生物技術有限公司。

2 方法

2.1 小鼠膀胱癌 MB 49 細胞皮下移植瘤模型的建立將 36 只小鼠按隨機數字表法分爲 3 組,疫苗組、PBS 對照組和正常對照組。用 PBS 調整對數生長期 MB 49 細胞濃度至 5×106/ml,注射於各組小鼠右前腋皮下,每隻 0.2 ml,建立 MB 49 細胞皮下移植瘤模型[4].

2.2 疫苗製備與接種凍融法制備 MB 49 粗提全抗原,按原細胞的比例 10:1 負載DC 2.4,製備 DC 2.4 疫苗。調整疫苗細胞濃度至 1×106/ml,各組小鼠分別於建模第 7 d、14 d 給予相應治療:疫苗組給予疫苗 0.1ml + PBS 0.1 ml,PBS 對照組給予 PBS 0.2 ml,注射於小鼠接種瘤細胞處皮下。正常組正常飼養。

2.3 疫苗免疫學效應檢測尼龍毛柱法分離各組小鼠脾 T 細胞,RPMI-1 640 調整細胞濃度至 1×107/ml.以 FITC-CD 4 和 PE-CD 69 雙標;流式細胞術檢測T 細胞 CD 4、CD 69 表達。取分離的` T 淋巴細胞,PBS 調整細胞濃度爲 5×107/ml,24 孔板,37℃培養箱培養 48 h,取上清,ELISA法檢測 IFN-γ 含量。石蠟包埋瘤組織切片,Envision 兩步法免疫組化染色。免疫組化圖像分析系統分析,計數CD 4+和CD 8+細胞數。

2.4 統計學方法應用 SPSS13.0 軟件進行數據處理和統計學分析,計量資料採用t 檢驗,計數資料採用χ2檢驗,P<0.05,差異具有統計學意義。

3 實驗結果

3.1 流式細胞術檢測比較各組小鼠脾 CD 4+、CD 4+CD 69+T 細胞數流式檢測小鼠脾 CD 4+、CD 4+CD 69+T 細胞數,疫苗組均高於PBS 對照組和正常組,P < 0.01,差異具有統計學意義,(其中 1組P < 0.05),見表 1.各組取 1 張流式圖進行比較,見圖 1.

3.2 ELISA 法檢測比較各組小鼠脾 T 細胞培養上清 IFN-γ 水平脾 T 細胞培養上清 IFN-γ 水平,疫苗組高於 PBS 對照組和正常組,P < 0.01,差異具有統計學意義。見表 2.

3.3 免疫組化檢測比較各組小鼠瘤組織 CD 4+、CD 8+細胞數免疫組化檢測小鼠瘤組織 CD 4+、CD 8+細胞數,疫苗組 CD4+和 CD 8+T 細胞數均高於 PBS 對照組,P < 0.01,差異具有統計學意義。見表 3.

4 討論

CD 69 是一個早期淋巴細胞活化的標誌,近年的研究表明[5],CD 69 抗原的表達在 T 細胞活化的過程中起重要作用。DC 2.4 疫苗刺激 T 細胞活化和增殖,使脾內 CD 4+、CD 4+CD 69+細胞數增加。DC 2.4 能透過分泌細胞因子和趨化因子趨化 T 細胞,透過血管內皮屏障而增加腫瘤部位的效應 T 細胞數量[6] 4+T 細胞在 IL-12 等細胞因子促進下可極化爲 Th 1 細胞,Th 1 細胞產生IL-2、IFN-γ 等細胞因子,促進 Th 1 細胞、CTL 的增殖,從而放大免疫效應。CD 8+CTL 透過溶細胞作用直接殺傷腫瘤細胞和透過分泌 IFN-γ、TNF 間接殺傷腫瘤細胞。[圖略]