【摘要】 目的 建立高效液相色譜法測定白花蛇舌草中槲皮素含量的方法。方法 採用Hypersil BDS C18色譜柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流動相爲甲醇?水?磷酸(體積比50∶50∶0.2) ，檢測波長爲370 nm。結果 槲皮素在0.08～ 0.32 μg 的範圍內與峯面積呈良好線性關係(r=0.999 6)，平均加樣回收率爲101.5%，RSD爲0.8%(n=6)。結論 本法快速、簡便、準確，可用於測定白花蛇舌草中槲皮素的含量，爲評價白花蛇舌草的內在質量提供科學依據。
【關鍵詞】 白花蛇舌草 槲皮素 含量測定 高效液相色譜法
Abstract:Objective To determine the content of quercetin in Hedyotis diffusa Willd. Methods The analysis was performed on an HPLC C18 column (4.6 mm×200 mm，5 μm) at the detection wavelength of 370 nm. The mobile phase consisted of 0.2% phosphoric acid?methanol (50∶50) with a flow rate of 1 mL/min. Results The calibration curve was linear in the range of 0.08-0.32 μg of quercetin (r=0.999 6) average recovery was 101.5% with RSD 0.8% (n=6)lusion The method is simple，rapid and accurate for the determination of quercetin in Hedyotis diffusa Willd, which could be used for the quality control of Hedyotis diffusa Willd.
Key words:Hedyotis diffusa Willd.; quercetin; HPLC
白花蛇舌草爲茜草科植物白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd.)的乾燥全草，研究表明該植物主要含有黃酮類、三萜類、蒽醌類、環烯醚苷萜類、甾醇類、烷烴類等化學成分，具有抗肝炎、抗腫瘤、抗病毒、抗炎抑菌、降血脂及降血糖等多種藥理活性[1]。白花蛇舌草中黃酮類化合物的含量測定未見文獻報導，本文采用HPLC法測定了白花蛇舌草中槲皮素的含量，爲評價白花蛇舌草的內在質量提供科學依據。
1、儀器與藥品
高效液相色譜儀：P230高壓恆流泵/DAD230二極管陣列檢測器(大連依利特分析儀器有限公司)，Hypersil BDS C18色譜柱(4.6 mm×200 mm，5μm，大連依利特分析儀器有限公司);電子精密天平(Ohaus);KS?1500超聲清洗器(寧波科勝儀器廠);高速萬能粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)。
白花蛇舌草(市售，批號2006001，2006002，2006003)，經本校藥植教研室陳再興老師鑑定均爲白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd.);槲皮素對照品(中國藥品生物製品檢定所，批號100081-200406，供含量測定用);甲醇爲色譜純;水爲重蒸水。
2、結果與分析
2.1 色譜條件
色譜柱：Hypersil BDS C18色譜柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流動相：甲醇?水?磷酸(體積比50∶50∶0.2);檢測波長：370 nm，流速：1 mL/min，柱溫：25 ℃ ，進樣量：20 μL。色譜圖見圖1、2。
2.2 對照品溶液的製備
精密稱取經五氧化二磷乾燥過夜的槲皮素對照品適量，加甲醇製成每1 mL含槲皮素10 μg的溶液，即得。
2.3 樣品溶液的製備
取白花蛇舌草藥材粗粉1.0 g，精密稱定，置燒瓶中，精密加入50%(體積分數)甲醇20 mL和鹽酸1 mL，密塞，稱定重量，加熱迴流2 h，放冷，用50%(體積分數)甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜 (0.45 μm) 濾過，取續濾液，即得。
2.4 系統適用性試驗
分別取對照品溶液、供試品溶液各20 μL進樣測定，理論塔板數爲15 000，供試品溶液色譜圖中槲皮素峯與相鄰雜質峯的分離度大於1.5。
2.5 線性關係的考察
精密稱取經五氧化二磷乾燥過夜的槲皮素對照品10.0 mg，加甲醇定容至100 mL，分別精密量取上述對照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL 置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，製成系列濃度的溶液。分別精密吸取各溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以槲皮素峯面積(A)爲縱座標，槲皮素進樣量(m)爲橫座標，繪製準曲線，得迴歸方程爲A=274.79m+54.43，r=0.999 6，結果表明槲皮素在0.08～0.32 μg範圍內與峯面積成良好線性關係。
2.6 精密度試驗
取槲皮素對照品溶液20 μL ，重複進樣6次分別測定峯面積爲2 949，2 911，2 891，2 946，2 950，2 957， RSD爲0.9%(n=6)，結果表明精密度良好。
2.7 穩定性試驗
取供試品溶液(批號2006001)，分別在2、4、6、8、10、12 h進樣，測得槲皮素峯面積爲1 437，1 422，1 451，1 430，1 421，1 425，RSD爲0.8%，結果表明供試樣品溶液在12 h內穩定。
2.8 重現性試驗
取同一批號的白花蛇舌草5份，按“2.3”製備樣品溶液，進行測定，測得槲皮素的峯面積爲1 447，1 452，1 425，1 419，1 423，RSD爲1.1%(n=5)，結果表明該方法重現性良好。
2.9 回收率試驗
精密稱取已知含量的.白花蛇舌草(批號2006001)5份，分別加入槲皮素對照品適量，按“2.3”製備供試品溶液，測定含量，結果測得回收率101.8%，102.4%，101.9%，101.1%，100.4%，平均值爲101.5%;RSD爲0.8%。
2.10 樣品測定
分別取白花蛇舌草藥材3批(批號2006001，2006002，2006003)，按“2.3”製備供試品溶液，進樣測定，結果測得槲皮素質量分數分別爲：0.091 3，0.085 7和0.088 0 mg/g。
3、討 論
3.1 文獻報道槲皮素的檢測波長爲360nm[2,3]、254 nm[4] 、368 nm[5]，本文利用DAD二極管陣列檢測器對槲皮素對照品進行全波長掃描，結果最大吸收峯爲370.2 nm，故選擇370 nm爲檢測波長，見圖3。
3.2 實驗考察了不同比例的甲醇?水爲流動相，最後確定流動相爲甲醇?水?磷酸(體積比50∶50∶0.2)，柱溫25 ℃，流速1 mL/min，樣品中槲皮素達到良好的分離。
3.3 白花蛇舌草中黃酮類化合物的含量測定未見文獻報導，本文采用高效液相色譜法測定了白花蛇舌草藥材中槲皮素的含量，操作簡便、快速，可作爲白花蛇舌草質量控制的有效手段。
【參考文獻】
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