開題報告主要包括了綜述、關鍵技術、可行性分析和時間安排等四個方面，下面是小編蒐集整理的中醫學論文開題報告的範文，供大家閱讀借鑑。
論文題目：連花解毒顆粒急性毒性及解熱實驗研究
一、課題研究的目的與意義、國內外研究的發展概況和趨勢
1、課題研究的目的與意義
連花解毒顆粒由金銀花、牛蒡子、蘆根等多味中藥提取製成，該處方是我院中醫科專家長期在臨牀使用的驗方，具有清熱解毒，涼血利咽，宣肺化痰，止咳平喘的功效。臨牀適用於風熱感冒，溫病初起，流感、上呼吸道感染、咽炎、支氣管炎、腮腺炎、斑疹等病症治療[1-5]。中醫理論認爲：由於風熱之邪犯表，則熱鬱肌膚腠理，衛表失和，故見身熱較著，微惡風，汗泄不暢等症;風熱上擾則頭脹痛;風熱之邪上犯則咽燥或咽喉紅腫疼痛，口渴欲飲、鼻塞、流黃濁涕。中醫的“毒”含義甚廣，清熱解毒中藥所解之的“毒”爲火熱壅盛所致的“熱毒”及“火毒”，主要用於溫熱病及熱毒熾盛症。隨着現代醫學的不斷髮展，清熱解毒中藥所解之“毒”不僅包括“外源性之毒”(細菌、病毒、內毒素)，還包括氧自由基和細胞因子過度釋放等“內源性之毒”[6]。連花解毒顆粒所含主藥均爲清熱解毒中藥的典型代表，利用動物發熱模型對發熱過程進行模擬，從而對解熱作用進行進一步研究。本課題還對藥物的急性毒性進行了考察，爲臨牀安全用藥提供了實驗數據和理論基礎。
2、國內外研究的發展概況和趨勢
目前，國內外研究藥物急性毒性的方法有很多，經典的有半數致死量試驗(50%lethaldose，LD50)、最大給藥量試驗等，除此之外，還有限量試驗、近似致死劑量實驗、擴展試驗、固定計量法、劑量累積試驗等。中藥新藥中應用最多的是半數致死量和最大給藥量試驗。《中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則》規定未在國內上市的由中藥、天然藥物組成的非注射給藥的複方製劑，如該複方製劑處方組成符合中醫藥理論，有一定的臨牀應用經驗，一般情況下，可採用一種動物，按臨牀給藥途徑進行急性毒性反應的觀察。本課題選用齧齒類動物小鼠爲實驗動物，採用口服給藥方式，對連花解毒顆粒進行急性毒性反應的研究。發熱是清熱藥最主要的適應症之一，解熱作用是清熱藥的一個重要共性。在實驗中可以採用多種方法來引起實驗動物發熱，如細菌或細菌產物、造成無菌炎症、化學藥物、刺激丘腦體溫調節中樞及暴露於高熱壞境等，這些發熱模型均可用於解熱實驗研究，如目前國內外常用的有注射腐化枯草浸液、角叉菜膠、牛乳或蛋白腖、加熱殺死的革蘭陰性菌(大腸桿菌、傷寒或副傷寒桿菌、痢疾桿菌)菌液、傷寒副傷寒菌苗、啤酒酵母、2,4—二硝基苯酚等發熱方法研究中藥的解熱作用。爲了進行機制分析或特殊研究目的，還可選用內生致熱原生成及發熱試驗、微量PGE腦室內或下丘腦注射致熱試驗、LipidA、IL-1、干擾素及TNF性發熱試驗等[7]。本課題選用齧齒類動物大鼠爲實驗動物，擬採用角叉菜膠爲發熱模型致熱源，皮下注射可於局部產生強烈的炎症反應，此炎症的形成主要與其誘導前列腺素生物合成及釋放有關，可引起一個持續炎症反應，並激活巨噬細胞引發發熱。因其來源不同，其致熱作用有些差異，故於正式實驗前宜先做預試驗，以選擇適宜的種類、濃度與劑量，此外在預實驗階段觀察大鼠體溫變化全過程。
二、主要研究內容
本課題採用齧齒類動物大鼠和小鼠以口服給藥方式，對連花解毒顆粒進行以下兩個方面進行研究：
(一)連花解毒顆粒急性毒性反應的研究
(二)連花解毒顆解熱藥效學的研究
三、主要研究方案
1、連花解毒顆粒的急性毒性實驗
中藥新藥審評的技術要求規定，當受試藥物的毒性很低，或者因濃度或體積的限制，無法測出LD50時，可僅提供最大給藥量試驗的結果,測定其能達到人用量的多少倍，對藥物安全性進行評估，以耐受人用量口服100倍以上爲安全[8]。
1.1溶液的配製與預實驗
1.1.1溶液的配製連花解毒顆粒供試品1的製備：取連花解毒顆粒125.0g溶於100mL水中，攪拌均勻即得混懸藥液，此作爲連花解毒顆粒供試品1溶液(相當於人臨牀用量100倍)。連花解毒顆粒供試品2的製備：取連花解毒顆粒188.0g溶於100mL水中，攪拌均勻即得混懸藥液，此作爲連花解毒顆粒供試品2溶液。
1.1.2預實驗方法：
選擇體重約20g的健康小鼠10只，雌雄各半，實驗前禁食不禁水12h。每隻小鼠按100g/kg/d量於12h內給予灌胃供試品1溶液2次，灌胃體積爲0.4mL/10g，給藥後連續觀察7天。如果小鼠全部存活，則採用最大給藥量法進行實驗，如果小鼠部分或全部死亡則採用LD50的測定。選擇體重約20g的健康小鼠10只，雌雄各半，實驗前禁食不禁水12h。每隻小鼠按150g/kg/d量於12h內給予灌胃供試品2溶液2次，灌胃體積0.4mL/10g，給藥後連續觀察7天。
1.2最大給藥量法進行實驗
選擇體重約20g的健康小鼠48只，雌雄各半，分成兩組，每組24只，實驗前禁食不禁水12h。實驗組每隻小鼠按150g/kg/d量於12h內給予灌胃連花解毒顆粒供試品2溶液2次，灌胃體積爲0.4mL/10g。對照組每隻小鼠給以生理鹽水，一天兩次，灌胃體積爲0.4mL/10g。兩組小鼠給藥後連續觀察14天。期間若有死亡小鼠即刻尸解，肉眼觀察小鼠主要臟器(心、肝、脾、肺、腎等)的變化，若肉眼可見異常則進行病理檢查。若無14天后處死全部存活小鼠，解剖和屍檢內臟器官有無異常。並記錄14天內雌雄小鼠的行爲活動、被毛、面板、呼吸、大小便、食慾，鼻、眼、口腔有無異常分泌物等情況(見附錄Ⅰ)。根據公式計算出其能達到人用量的多少倍[9~11].150g/kg/d量於12h內給予灌胃供試品2溶液2次，灌胃體積爲0.4mL/10g，給藥後連續觀察7天。1.2最大給藥量法進行實驗選擇體重約20g的健康小鼠48只，雌雄各半，分成兩組，每組24只，實驗前禁食不禁水12h。實驗組每隻小鼠按150g/kg/d量於12h內給予灌胃連花解毒顆粒供試品2溶液2次，灌胃體積爲0.4mL/10g。對照組每隻小鼠給以生理鹽水，一天兩次，灌胃體積爲0.4mL/10g。兩組小鼠給藥後連續觀察14天。期間若有死亡小鼠即刻尸解，肉眼觀察小鼠主要臟器(心、肝、脾、肺、腎等)的變化，若肉眼可見異常則進行病理檢查。若無14天后處死全部存活小鼠，解剖和屍檢內臟器官有無異常。並記錄14天內雌雄小鼠的行爲活動、被毛、面板、呼吸、大小便、食慾，鼻、眼、口腔有無異常分泌物等情況(見附錄Ⅰ)。根據公式計算出其能達到人用量的多少倍[9~11]，計算公式如下：每隻的小鼠耐受藥量成人平均體重(60000g)小鼠的.最大耐受倍數(倍)小鼠平均體重(20g)成人每日用量。
2、連花解毒顆粒對角叉菜膠所致大鼠發熱的解熱作用[13-15]
2.1人與大鼠之間給藥量的換算
2.2致熱因子溶液的配製與發熱模型的建立
2.2.1致熱因子的製備：精密稱取角叉菜膠(卡拉膠)100mg置於試管中，加入滅菌生理鹽水(或蒸餾水)10mL，輕輕攪拌或搖勻，放置於4℃冰箱中過夜，次日晨取出，輕輕倒置數次直至混懸液均勻。
2.2.2發熱模型的建立：取12只健康大鼠，雌雄各半，於實驗前8～10h禁食，但不禁水。實驗前三天，每日測大鼠肛溫2次，實驗當日每小時測肛溫1次，連續3次，選取體溫變化不高於0.3℃的大鼠進行實驗，取被選中的大鼠肛溫平均值爲基礎體溫。於大鼠兩爪腳跖皮下各注射1%角叉菜膠懸液0.1mL/爪，分別於1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h測大鼠肛溫，觀察大鼠建模情況，如注射致熱因子4小時後，大鼠體溫開始升高，至6~7小時達高峯，並持續時間長於10小時，則可判斷爲建模成功，視情況調整致熱因子的種類和劑量。
2.3預實驗觀察：選取20只健康大鼠，雌雄各半，於實驗前8～10h禁食，但不禁水。實驗前三天，每日用體溫計測大鼠肛溫2次，實驗當日每小時測肛溫1次，連續3次，選取肛溫變化不高於0.3℃的大鼠進行實驗，取被選中大鼠肛溫的平均值爲基礎體溫。以角叉菜膠作爲致熱因子，參考相關文獻，在預實驗中設定兩種實驗方法：
①大鼠每天給濃度爲0.4g/mL連花解度顆粒3mL一次，連續3d。末次給藥後，用體溫計測量致熱前肛溫，然後於大鼠兩爪腳跖皮下各注射1%角叉菜膠懸液0.1mL/爪，此後分別於1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h測大鼠肛溫。
②於大鼠兩爪腳跖皮下各注射1%角叉菜膠懸液0.1mL/爪，此後立即給予每隻大鼠濃度爲
0.4g/mL連花解度顆粒3mL，分別於1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h測大鼠肛溫。觀察動物反應情況和體溫變化，選擇最佳的實驗方法(給藥量計算：連花解毒顆粒60kg人每天用量爲60g，按體表面積折算0.2kg大鼠正常用量爲1.2g，0.2kg大鼠每次灌胃3mL，即連花解毒顆粒配製的濃度爲1.2g/3mL=0.4g/mL)。
2.4連花解度顆粒解熱效果正式實驗：根據預實驗結果，選取實驗方案。大鼠於實驗前8～10h禁食，但不禁水。每日用體溫計測大鼠肛溫2次，連續3日，實驗當日每小時測體溫1次，連續3次，選取體溫變化不高於0.3℃的健康大鼠，取被選中大鼠體溫的平均值爲基礎體溫。將大鼠隨機分成七組，灌服以下七種藥物：
①連花解毒顆粒低劑量組：0.2g/mL連花解度顆粒3mL
②連花解毒顆粒中劑量組：0.4g/mL連花解度顆粒3mL
③連花解毒顆粒高劑量組：0.8g/mL連花解度顆粒3mL
④雙黃連顆粒陽性對照品組：0.2g/mL柴黃顆粒3mL
⑤阿司匹林陽性對照品組：6.7mg/mL阿司匹林3mL
⑥空白輔料對照組：266.7mg/mL空白輔料3mL
⑦模型組：不給藥根據預實驗確定的試驗方法建模，於1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h測大鼠肛溫。記錄每隻大鼠的體溫變化並繪製曲線圖，利用SPSS軟件分析計算，判斷連花解毒顆粒組與模型組體溫差別是否有統計學意義(P<0.05)，即連花解毒顆粒的解熱效果(給藥量計算：①連花解毒顆粒60kg人每天用量爲60g，按體表面積折算0.2kg大鼠正常用量爲1.2g，0.2kg大鼠每次灌胃3mL，因此配製的連花解毒顆粒中劑量組濃度爲1.2g/3mL=0.4g/mL;②雙黃連顆粒60kg人每天用量爲30g，則大鼠正常用量爲0.6g，因此配製的雙黃連顆粒的濃度0.6g/3mL=0.2g/mL;③透過查閱文獻，解熱實驗大鼠阿司匹林對照組用量爲20mg/d，因此配製阿司匹林濃度爲20mg/3mL=6.7mg/mL;④連花解毒顆粒人每天用量爲40g，0.2kg大鼠正常用量爲0.8g，0.2kg大鼠每次可灌胃3mL，0.8g/3mL=266.7mg/mL)。
參考文獻：
[1]何晶.金銀花的藥理作用及臨牀應用[J].天津藥學,2008,20(5),74-76.
[2]倪華，施霞，劉雲海.板藍根化學成分及其藥理活性研究進展[J].齊齊哈爾醫學院學報，2008，29(13)，1609-1610.
[3]國家藥典委員會，中華人民共和國藥典第一部[M].北京，化學工業出版社，2010，20.
[4]簡永耀，靳龍文.連翹的化學成分及藥理學研究[J].淮海醫藥，2009,27(4)，349—350.
[5]於宏.牛蒡子的化學成分與生物活性[J].外醫藥植物藥分冊，2007，22(6)，244-245.
[6]李鳴真，葉望雲，陸付耳.中醫“清熱解毒”法實質的研究[J].浙江中西醫結合雜誌，2000，10(8)：449-451.
[7]陳奇.中藥藥理研究方法學(第2版)[M].北京：人民衛生出版社.2006，276-297.
[8]國家藥品監督管理局，中藥新藥研究的技術要求，1997.
[9]王一荃，王祝鳴，童華.中藥金衡靈急性毒性和反覆給藥毒性試驗研究[J].中華臨牀醫師雜誌，2010，4(2)：36-41.
[10]徐鑫，周昆，屈彩芹.香加皮配方顆粒的急性毒性和蓄積毒性實驗研究[J].江蘇中醫藥，2008，40(10):117-118.
[11]萬啓南，曹東，李遊，葉勇，施燎明，李映雪.清熱解毒扶正顆粒小鼠急性毒性試驗[J]，雲南中醫中藥雜誌，2010，31(9)：72.
[12]章元沛.藥理實驗方法學(第二版)[M].北京:人民衛生出版社.1996，238.
[13]周軍，何飛，韋桂寧，陳敬民，李友弟，李翠紅.銀胡感冒海綿劑解熱、抗炎、鎮痛作用的實驗研究[J].中國藥師，2010，13(8)：1078-1081.
[14]陳敬然，孫紅梅，尹曉飛，蔡大偉，李冬梅，王書傑.牛黃解毒滴丸解熱鎮痛和抗炎作用實驗[J].中國藥師，2010，13(9)：1257-1259.
[15]邱彥，司樑宏，劉靜，劉梅，陸瑜.十味板藍根顆粒解熱鎮痛作用的實驗研究[J].中藥材，2009,32(7)：1117-1119.