據研究學者作切片之前將組織侵泡於蔗糖溶液和對載玻片進行防脫片處理可以極大地提升冰凍切片的質量，下面是小編蒐集的一篇相關論文範文，歡迎閱讀借鑑。
冰凍切片是將生物組織置於低溫下迅速凍結達到一定硬度後進行切片的一種實驗技術，與常規的石蠟切片相比，它不經脫水、透明、浸蠟等步驟，因此組織不會收縮，易保持原有生活形態，具有快速、簡便、易操作等優點，常用於組織化學、免疫定位及原位雜交等研究[1,2].由此可知，冰凍切片具有製作迅速，耗時短的優點，但是固定組織在製片過程中經常出現組織脫片，組織腫脹或過度收縮，冰晶形成過多等問題。這些問題將導致實驗資訊的丟失，使最終得出的結果不準確。因此，本試驗以福兒馬林固定的豬肺爲試驗材料進行冰凍切片，透過對載玻片進行防脫片處理，以及將材料浸泡於蔗糖溶液中降低冰晶的產生等方法，探索固定組織冰凍切片的有效方法，爲臨牀病理學診斷提供試驗依據。
1材料和方法
1.1試驗材料。用中性福兒馬林固定豬肺，由延邊大學農學院動物醫學系病理實驗室提供。
1.2方法
1.2.1載玻片的處理。將新購未經處理的載玻片經1%鹽酸浸泡24h,流水沖洗，再經洗滌劑浸泡24h,流水沖洗，烘乾，分別經蛋白甘油、多聚賴氨酸、明膠硫酸鉻鉀處理，
1.2.2組織的處理。將取好的組織，分爲兩組，第一組流水沖洗24h.第二組流水沖洗24h,再浸泡在20%蔗糖24h,30%蔗糖3天。
1.2.3切片
(1)包埋：從冰凍機中取出包埋託，用水沖洗略去掉表面冰霜，用幹紗布擦乾，滴加0.3cm厚包埋劑，然後將取材的組織放在包埋劑上。對於含水分較多的組織先用紗布吸乾組織表面水分再進行包埋。包埋後在組織周圍進一步補充包埋劑，儘量將組織包在其中[4].
(2)時間及溫度：將包埋好的組織放入冰凍機的冷凍臺上冷凍。根據不同組織將溫度控制在-18℃~-30℃。嚴格控制冷凍時間，以剛剛凍上即止爲宜。
(3)切片及貼片：組織凍好後，進行切片、貼片。切片厚度一般爲10μm,脂肪組織可稍厚些藉助載玻片與冰凍。冰凍切片與載玻片存在明顯溫差，利用這一原理可將二者牢固的貼附在一起。
1.2.4切片的HE染色方法。蘇木精染色液是關鍵的藥品，要嚴格進行配置，配製方法：先把2g蘇木精和20ml無水乙醇互溶，然後將40g硫酸鋁鉀溶於400ml蒸餾水需加熱溶解並用玻璃棒不斷攪拌，再將以上這兩種液體混合後煮大約1min待沸騰，離火後向該混合液快速加入1g氧化*，並用玻璃棒攪拌至染色液變爲紫紅色，然後需冷卻至室溫，加入16ml冰醋酸並混勻，濾過後使用。乙醇鹽酸配製成1%濃度的分化液方法：1ml濃鹽酸，99ml75%乙醇。0.2%氨水配製方法：25%-28%氨水0.2ml,蒸餾水染色程序：蒸餾水(2min)→蘇木精(5min)→水洗(20min)→1%鹽酸乙醇分(2s)→蒸餾水(1min)→0.2%氨水返藍(30s±)→蒸餾水(1min)→伊紅(4min)→蒸餾水(1min)→70%乙醇(1min)→80%乙醇(1min)→90%(1min)→95%乙醇(1min)→無水乙醇(1min)→無水乙醇：二甲苯1:1(1min)→二甲苯(I5min)→二甲苯I(I10min);用樹膠封片，進行鏡下觀察。
2結果
2.1防冰晶作用。經蔗糖浸泡過的組織，切片完整、厚薄均勻、不易形成皺摺;鏡下組織結構完整，細胞形態清晰，染色鮮豔，胞質與胞核紅藍對比鮮明，細胞無腫脹且無明顯收縮，組織無人爲裂隙，無空泡及空網狀形成，而未經蔗糖浸泡過的組織，切片不完整，組織中有許多空隙，厚薄不一，鏡下組織結構不完整。
2.2防脫片作用。如表1所示，多聚賴氨酸的脫片數爲零，在四個試劑中防脫片效果最佳。其次是明膠硫酸鉻鉀，脫片數爲二，防脫片效果也很優秀。而經蛋白甘油處理過的載玻片和從試劑公司購買的載玻片脫片現象嚴重。【1】
3討論
冰凍切片是較難掌握的病理技術之一，要製作出一張高質量的冰凍切片，冰凍製片每一步都應嚴格要求，減少冰凍切片的人工誤差，才能更好地應用於臨牀。據研究學者作切片之前將組織侵泡於蔗糖溶液和對載玻片進行防脫片處理可以極大地提升冰凍切片的質量。將組織置於恆冷箱切片機後，組織中的水分子就會逐漸凝固，最終產生冰晶，而冰晶的體積大於水分子，因此會佔據更多空間，使得周圍細胞器的空間被壓縮，當操作員將冰凍切片從切片機中移到室溫環境時，由於溫度的升高，冰晶又融化回水分子，體積減小造成組織上空隙的形成，使組織碎片化，嚴重影響後續的步驟。水在-4℃時體積達到最大值，這意味着組織在-4℃左右的`低溫度中放置時間越久，組織內所產生的冰晶的體積越大、數量越多，即組織冷凍的速度與組織內形成冰晶的數量成反比。因此，要儘量避免冷卻速度緩慢的情況，應使組織所處環境的溫度迅速降至-4℃以下;或者將組織進行脫水處理來減少冰晶的形成。OCT膠是最佳切片溫度溶液，是一種多糖類物質，它既可以對支架起到包埋作用，又可以對組織進行脫水，但它的脫水效果遠不及蔗糖溶液明顯[3].本試驗結果表明，蔗糖處理，可有效提高切片的質量，減少冰晶的產生。脫片是指組織從載玻片上脫落，分離或懸浮但尚未脫下。
載玻片的處理及工作人員對切片製作的熟練度等都能影響冰凍切片的脫片情況，固定組織冰凍切片很容易脫片，給後續染色等過程帶來了很麻煩與不便，這些因素會使冰凍切片在染色過程中脫片程度不一，切片可能是邊緣部輕度捲曲，也可能是不同面積的脫落或完全脫片。如何處理載玻片是防脫片的關鍵步驟，據報道防脫片劑有多種類型，如蛋白甘油，多聚賴氨酸，明膠硫酸鉻鉀。其中多聚賴氨酸溶液配製方便，該多聚陽離子分子與組織切片上的陰離子相互作用產生較強的粘附力，粘附效果顯着。可用於組織切片，細胞切片，冰凍切片等，能切實有效的降低脫片現象[4].本試驗結果表明，多聚賴氨酸的脫片數爲零，在四個試劑中防脫片效果最佳。其次是明膠硫酸鉻鉀，脫片數爲二，防脫片效果也很優秀。而經蛋白甘油處理過的載玻片和從試劑公司購買的載玻片脫片現象嚴重。總之，冰凍切片不易掌握，要做好一張冰凍切片不能只注重速度，其他方面也很重要。爲了不誤診，漏診，確保結果的準確迅速，需要工作人員在進行冰凍切片時有嚴格的責任心，密切聯繫臨牀，嚴謹的工作態度，豐富的工作實踐經驗，不斷總結自己過往的經驗，從而不斷的提升自己的技術水平。
參考文獻
[1]劉成龍，餘琦，週會芹.7種固定液對冷凍組織切片固定效果的比較[J].診斷病理學雜誌，2010,2:138.
[2]楊秀靜，滕孝靜.冰凍切片技術經驗探討[J].臨牀和實驗醫學雜，2014,23:2002-2004.
[3]周喜鳳.製作優質冰凍切片的體會[J].基層醫學論壇，2015,11:1527.
[4]許平，王筱璨，陳奎生.快速冰凍切片製備方法的改進[J].鄭州大學學報(醫學版)，2010,2:241-243.